মাঙ্কিপক্স ভাইরাস নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ কিট (ফ্লুরোসেন্স পিসিআর পদ্ধতি)
[স্পেসিফিকেশন]
24 পরীক্ষা/কিট, 48 পরীক্ষা/কিট, 96 পরীক্ষা/কিট
[উদ্দেশ্যে ব্যবহার]
এই কিটটি সন্দেহভাজন সংক্রামিত রোগীদের সম্পূর্ণ রক্ত, সিরাম বা ক্ষত এক্সিউডেট নমুনা থেকে নিষ্কাশিত মাঙ্কিপক্স ভাইরাল ডিএনএর গুণগত সনাক্তকরণ এবং অন্যান্য রোগীদের রোগ নির্ণয়ের জন্য ব্যবহার করা হয়।
[নীতি]
এই কিটটি রিয়েল-টাইম ফ্লুরোসেন্ট পিসিআর প্রযুক্তি ব্যবহার করে মানকিপক্স ভাইরাস নিউক্লিক অ্যাসিড খণ্ডের একটি অপেক্ষাকৃত সংরক্ষিত অঞ্চলকে পরিবর্ধন লক্ষ্য অঞ্চল হিসাবে নির্বাচন করে, নির্দিষ্ট প্রাইমার এবং বিভিন্ন ফ্লুরোসেন্ট প্রোব লেবেল ডিজাইন করে, এবং নমুনায় মাঙ্কিপক্স ভাইরাল রয়েছে কিনা তা সনাক্ত করতে RT-PCR প্রযুক্তি ব্যবহার করে। ডিএনএ।
[উপাদান]
| স্পেসিফিকেশন |
উপাদান |
প্যাকেজ |
উপকরণ |
| 24 পরীক্ষা/কিট |
MPV PCR রিজেন্ট A |
408μL×1 টিউব |
নির্দিষ্ট প্রাইমার, প্রোব, ট্রিস-হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড বাফার ইত্যাদি। |
| MPV PCR বিকারক B |
72μL×1 টিউব |
হট-স্টার্ট Taq এনজাইম, uracil-N-glycosylase, ইত্যাদি। |
| MPV ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×1 টিউব |
টার্গেট জিন ধারণকারী ডিএনএ সিকোয়েন্স |
| MPV নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×1 টিউব |
NaCl |
| 48 পরীক্ষা/কিট |
MPV PCR রিজেন্ট A |
816μL×1 টিউব |
নির্দিষ্ট প্রাইমার, প্রোব, ট্রিস-হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড বাফার ইত্যাদি। |
| MPV PCR বিকারক B |
144μL×1 টিউব |
হট-স্টার্ট Taq এনজাইম, uracil-N-glycosylase, ইত্যাদি। |
| MPV ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×1 টিউব |
টার্গেট জিন ধারণকারী ডিএনএ সিকোয়েন্স |
| MPV নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×1 টিউব |
NaCl |
| 96 পরীক্ষা/কিট |
MPV PCR রিজেন্ট A |
816μL×2 টিউব |
নির্দিষ্ট প্রাইমার, প্রোব, ট্রিস-হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড বাফার ইত্যাদি। |
| MPV PCR বিকারক B |
144μL×d টিউব |
হট-স্টার্ট Taq এনজাইম, uracil-N-glycosylase, ইত্যাদি। |
| MPV ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×2 টিউব |
টার্গেট জিন ধারণকারী ডিএনএ সিকোয়েন্স |
| MPV নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ |
400 μL×2 টিউব |
NaCl |
বিঃদ্রঃ:
সনাক্তকরণের জন্য বিভিন্ন ব্যাচ থেকে উপাদান মিশ্রিত করবেন না।
নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন বিকারক: Dewei দ্বারা নির্মিত নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন বিকারক সুপারিশ.
ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ব্যবহার করার সময় নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের প্রয়োজন নেই, নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ব্যবহার করার সময় নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন প্রয়োজন।
[সঞ্চয়স্থান এবং স্থিতিশীলতা]
কিটটি 12 মাসের জন্য -20±5 ℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
অস্থায়ীভাবে 7 দিনের জন্য 4 ℃ এ সংরক্ষণ করুন।
বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো 7 বারের বেশি হওয়া উচিত নয়, খোলার বিকারক 7 বারের বেশি হওয়া উচিত নয়।
কম তাপমাত্রা পরিবহন রাখতে শুকনো বরফ 4 দিনের বেশি হওয়া উচিত নয়।
[যন্ত্রগুলি]
রিয়েল-টাইম পিসিআর যন্ত্র যেমন ABI7500, ABI7300, LightCycler480, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S এবং QuantStudio।
[স্যাম্পলিং এবং হ্যান্ডলিং]
- উপযুক্ত নমুনার ধরন: সিরাম এবং ক্ষত এক্সিউডেট নমুনা।
2. সংগ্রহ: নমুনা স্ট্যান্ডার্ড অনুযায়ী জীবাণুমুক্ত টিউবে সংগ্রহ করা উচিত
প্রযুক্তিগত বিবরণ.
সংগ্রহস্থল: সংগৃহীত নমুনা অবিলম্বে সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহার করা উচিত বা হিমায়িত এ
≤-20°C এক মাসের বেশি নয়। বারবার জমাট বাঁধা এবং গলানো এড়ানো উচিত।
3. পরিবহন: নমুনাটি বরফ দিয়ে সিল করা ফোম বক্স ব্যবহার করে পরিবহন করা উচিত।
[প্রটোকল]
- নমুনা চিকিত্সা এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশন (নমুনা চিকিত্সা এলাকা)
ভাইরাল ডিএনএ নিষ্কাশন কিটগুলির সংশ্লিষ্ট প্রয়োজনীয়তা এবং পদ্ধতি অনুসারে নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের জন্য 200μL তরল নমুনা, ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ নেওয়ার সুপারিশ করা হয়।
- পিসিআর রিএজেন্ট প্রস্তুতি (রিএজেন্ট প্রস্তুতি এলাকা)
পিসিআর টিউবগুলিকে প্রতিক্রিয়া ট্যাঙ্কে রাখুন এবং প্রতিটি প্রতিক্রিয়ার নামগুলি অনুরূপ ক্রমে ভালভাবে সেট করুন।
কিট থেকে MVP PCR রিএজেন্ট A এবং B বের করুন, ঘরের তাপমাত্রায় গলান, ঝাঁকান এবং মিশ্রিত করুন, ব্যবহারের আগে কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন।
পিসিআর প্রতিক্রিয়া টিউবগুলির N পিসি নিন (N = পরীক্ষা করা নমুনার সংখ্যা + নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ + ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ)
এমভিপি একক পরিবর্ধন সিস্টেমের কনফিগারেশন নিম্নরূপ:
| MPV PCR রিজেন্ট A |
17μL |
| MPV PCR বিকারক B |
3μL |
| পরিবর্ধন সিস্টেম |
20μL |
উপাদানগুলিকে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করার পরে, অল্প সময়ের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন যাতে টিউব প্রাচীরের সমস্ত তরল টিউবের নীচে কেন্দ্রীভূত হয় এবং তারপরে পিসিআর টিউবে পরিবর্ধন ব্যবস্থার 20 μl বিতরণ করা হয়।
- নমুনা (নমুনা প্রস্তুতি এলাকা)
প্রতিটি প্রক্রিয়াকৃত নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের 5µl যোগ করুন, পরীক্ষা করা নমুনার নিউক্লিক অ্যাসিড এবং উপরের পিসিআর টিউবগুলিতে MVP পজিটিভ কন্ট্রোল, টিউব ক্যাপগুলিকে শক্ত করুন এবং কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন, তারপরে পরিবর্ধন সনাক্তকরণে স্থানান্তর করুন। এলাকা
- পিসিআর প্রশস্তকরণ (বিবর্ধন এলাকা)
পিসিআর টিউবগুলিকে প্রতিক্রিয়া ট্যাঙ্কে রাখুন এবং প্রতিটি প্রতিক্রিয়ার নামগুলি অনুরূপ ক্রমে ভালভাবে সেট করুন।
সনাক্তকরণ ফ্লুরোসেন্স সেটিংস: (1) Monkeypox ভাইরাস (FAM);(2) অভ্যন্তরীণ নিয়ন্ত্রণ (CY5)।
নিম্নলিখিত সাইক্লিং প্রোটোকল চালান: ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S এবং QuantStudio, আরও ভাল অপারেশনের জন্য অনুগ্রহ করে ইন্সট্রুমেন্ট ব্যবহারকারী ম্যানুয়াল দেখুন:
| |
ধাপ |
তাপমাত্রা |
সময় |
সাইকেল |
| 1 |
প্রি-ডেনেচুরেশন |
95 ℃ |
২ মিনিট |
1 |
| 2 |
বিকৃতকরণ |
95 ℃ |
10 সে |
45 |
| অ্যানিলিং, এক্সটেনশন, ফ্লুরোসেন্স অধিগ্রহণ |
60 ℃ |
30 সে |
- ফলাফল বিশ্লেষণ (অনুগ্রহ করে ইন্সট্রুমেন্ট ইউজার ম্যানুয়াল পড়ুন)
প্রতিক্রিয়া পরে, ফলাফল স্বয়ংক্রিয়ভাবে সংরক্ষণ করা হবে.বিশ্লেষণ করতে "বিশ্লেষণ করুন" এ ক্লিক করুন, এবং যন্ত্র স্বয়ংক্রিয়ভাবে ফলাফল কলামে প্রতিটি নমুনার Ct মান ব্যাখ্যা করবে।নেতিবাচক এবং ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ফলাফল নিম্নলিখিত মেনে চলতে হবে
"5. মান নিয়ন্ত্রণ"।
নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: FAM চ্যানেলে Ct বা Ct>40 নেই, CY5 চ্যানেলে Ct≤40 স্বাভাবিক পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ।
ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ: সাধারণ পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ FAM চ্যানেলে Ct≤35, CY5 চ্যানেলে সাধারণ পরিবর্ধন বক্ররেখা সহ Ct≤40।
উপরের সমস্ত মানদণ্ড পূরণ হলে ফলাফল বৈধ।অন্যথায়, ফলাফল অবৈধ।
[ফলাফলের ব্যাখ্যা]
নিম্নলিখিত ফলাফল সম্ভব:
| |
FAM চ্যানেলের Ct মান |
CY5 চ্যানেলের Ct মান |
ব্যাখ্যা |
| 1# |
Ct বা Ct>40 নেই |
≤40 |
মাঙ্কিপক্স ভাইরাস নেতিবাচক |
| 2# |
≤40 |
যেকোনো ফলাফল |
মাঙ্কিপক্স ভাইরাস পজিটিভ |
| 3# |
40~45 |
≤40 |
পুনরায় পরীক্ষা;যদি এটি এখনও 40~45 হয়, তাহলে 1# হিসাবে রিপোর্ট করুন |
| 4# |
Ct বা Ct>40 নেই |
Ct বা Ct>40 নেই |
অবৈধ |
দ্রষ্টব্য: অবৈধ ফলাফল দেখা দিলে, নমুনা সংগ্রহ করে আবার পরীক্ষা করতে হবে।
[শনাক্তকরণ সীমাবদ্ধতা]
এই কিটের সনাক্তকরণ ফলাফল শুধুমাত্র ক্লিনিকাল রেফারেন্সের জন্য, এবং এটি সরাসরি ক্লিনিকাল রোগ নির্ণয় এবং চিকিত্সার প্রমাণ হিসাবে ব্যবহার করা উচিত নয়।রোগীদের ক্লিনিকাল ব্যবস্থাপনা তাদের লক্ষণ, চিকিৎসা ইতিহাস এবং এক্সপোজার ইতিহাসের সাথে একত্রে বিবেচনা করা উচিত।
সনাক্তকরণ ফলাফল নমুনা সংগ্রহ, সঞ্চয়স্থান এবং পরিবহন সহ অপারেশন দ্বারা প্রভাবিত হতে পারে।অপারেশনে কোনো ভুল থাকলে ফলস নেতিবাচক ফলাফল হতে পারে।নমুনা চিকিত্সার সময় ক্রস দূষণ মিথ্যা ইতিবাচক ফলাফল হতে পারে।
[পারফরমেন্স স্পেসিফিকেশন]
সনাক্তকরণ সীমাবদ্ধতা: 500 কপি / এমএল।
যথার্থতা: ব্যাচের মধ্যে/ব্যাচের মধ্যে যথার্থতার Ct মানের প্রকরণের সহগ (CV, %) হল ≤5%।
নির্ভুলতা: নেতিবাচক/ইতিবাচক রেফারেন্সের সামঞ্জস্য হার: 100%।
নির্দিষ্টতা: মানব জিনোম এবং নিম্নলিখিত রোগজীবাণুগুলির সাথে কোনও ক্রস-প্রতিক্রিয়া নেই: স্মলপক্স ভাইরাস, ভেড়া পক্স ভাইরাস, ভ্যাক্সিনিয়া ভাইরাস, চিকেন পক্স ভাইরাস, হেপাটাইটিস বি ভাইরাস, হেপাটাইটিস সি ভাইরাস, হিউম্যান ইমিউনোডেফিসিয়েন্সি ভাইরাস, এন্টারোভাইরাস।
[মনোযোগ]
- এই পণ্য শুধুমাত্র ভিট্রো পরীক্ষার জন্য ব্যবহার করা হয়.ব্যবহারের আগে এই ম্যানুয়ালটি সাবধানে পড়ুন।
- সনাক্তকরণের সময় জীবাণুমুক্ত, DNase-মুক্ত এবং RNase-মুক্ত টিউব এবং টিপস ব্যবহার করুন।
- সনাক্তকরণের সময়, ক্রস-দূষণ এড়াতে, উপযুক্ত প্রতিরক্ষামূলক সরঞ্জাম, ডিসপোজেবল গ্লাভস এবং মুখোশ পরা এবং শ্বাসযন্ত্রের ট্র্যাক্টে ক্ষতিকারক পদার্থ প্রবেশ করা এড়াতে বায়োসেফটি ক্যাবিনেটে অপারেশনটি সম্পূর্ণ করা প্রয়োজন।
- ব্যবহারের সময় ত্বক এবং শ্লেষ্মা ঝিল্লির সাথে যোগাযোগের ক্ষেত্রে, অনুগ্রহ করে অবিলম্বে প্রবাহিত জল দিয়ে ধুয়ে ফেলুন, যা অপারেটরের কোন ক্ষতি করবে না।
ব্যবহারের আগে সমস্ত তরল বিকারককে সম্পূর্ণরূপে গলিয়ে ঘরের তাপমাত্রায় মিশ্রিত করতে হবে এবং ব্যবহারের আগে কয়েক সেকেন্ডের জন্য 8,000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করতে হবে।
ব্যবহারের পরে, দূষণ প্রতিরোধ করার জন্য প্যাকেজিং এবং বর্জ্য তরলকে অবশ্যই চিকিৎসা বর্জ্য হিসাবে সমানভাবে চিকিত্সা করা উচিত।
আপনার বার্তাটি 20-3,000 টির মধ্যে হতে হবে!
